將肺炎衣原體包被于微孔板→加入血清,使得抗原抗體結合→37℃育溫1小時→洗去未結合的抗體→加入酶結合物→37℃育溫1小時→洗去酶結合物→加入底物→加入終止液450nm→讀取吸光值→結果計算

實驗流程：2×50ul陰性對照、1×50ul陽性對照和稀釋后的樣本加入到微孔板里→37C育溫1小時→洗液洗滌3次→加入50ulHRP酶結合物→37℃育溫1小時→洗液洗滌3次→加入100ulTMB底物→室溫平衡15分鐘→加入100ul終止液→450nm讀取吸光度→計算結果

操作步驟：

試劑準備：

1．所有試劑使用前混勻并平衡至室溫。

2．洗液20倍稀釋：如50ul濃縮洗液加入950ml水。酶結合物1:300稀釋（如10ul加入300ul的稀釋液）。

3．血清樣本1:105稀釋，如加入5ul的血清，加520ul的樣本稀釋液，或者采用兩步法稀釋，加入10ul病人血清，加入200ul樣本稀釋液，取出該稀釋后的溶液25ul，再加入100ul的樣本稀釋液（陰性、陽性和標準品按以上比例稀釋）。

4．每孔加入50ul的稀釋后的液體（空白孔加入樣本稀釋液）。

5．封膜后，37℃育溫1小時，拍干液體。

6．用稀釋后的洗液每孔300-350ul洗滌3次。

7．拍干后加入酶結合物的稀釋液50ul。

8．封膜后，37℃育溫1小時，拍干液體。

9．重復第6步。

10．加入100ul底物，室溫放置15分鐘。

11．加入終止液100ul。

12．30分鐘內檢測450/620nm檢測吸光度。 

檢測的有效性：

檢測結果必須符合下列條件，否則重新測試。

1．陽性對照吸光度值必須≥0.8（450nm讀取吸光度）

2．陰性對照的平均值必須0.1＜NC≤0.4（450nm讀取吸光度）